一、方法一 甲醒滴定法
1.原理
氨基酸具有酸性的-COOH和碱性的-NH2，它们互相作用使
氨基成为中性的内盐，加入甲醒溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失。再用碱来滴定-COOH，并用间接的方法测定氨基酸的量。
2. 试剂
( 1 ) 40%中性甲醒用百里盼歌作指示剂，将甲醒用碱性溶液中和至淡蓝色。
( 2 ) 0.1%百里盼歌乙醇溶液。
( 3 ) 0.1mol/L氢氧化纳标准溶液按测定大曲酸度方法中配制与标定。
3. 试验程序
吸取试样50mL于250mL具塞锥形瓶中，加入3滴百里酚酞指示剂，用O.lmol几氢氧化销标准溶液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛2OmL，摇，匀，静置5min ，此时蓝色已经消失，再用0.1mol/L氢氧化纳标准溶液滴定至淡蓝色，记录第二次滴定时消耗的碱液体积V1 (mL)。
4. 计算
式中 c一一氢氧化锅标准溶液物质的量浓度， mol/L
V1一一滴定消耗氢氧化纳标准溶液的体积， mL v-一试样体积， mL
0.014一一氮的毫摩尔质量，g/mmol
5. 说明
( 1 )用氢氧化销标准溶液第一次滴定时用pH计控制滴定，
pH7.5后加入中性甲醛，继续用氢氧化纳标准溶液滴定至 pH9.2为终点较为正确。
( 2 )取相同两份样品溶液，其中一份加入中性红指示剂3滴，用0.1mol/L氢氧化锅标准溶液滴定至玻础色为终点，另一份加入百里盼歌指示剂3滴和甲醒20mL，静置1h后，用0.1mol/L氢氧化纳标准溶液滴定至淡蓝色为终点。
二、方法二 茚三酮比色法
1.原理
氨基酸在一定的pH条件下与茚三酮发生反应，生成蓝紫色化合物，可比色定量。
2. 鼠剂
( 1 )2%布兰翻溶液称取苟三酮0.5g，溶于25rnL热水中加入40mg氯化亚锡 (SnCI•H20 )拌匀作防腐剂，过滤，定容至25mL。
( 2 )磷酸盐缓冲液(pH8.04) 称取磷酸二氢饵0.045g，磷酸氢二纳(Na2HP04•12H20) 2.27g溶于水中，定容至100mL。
( 3 )氨基酸标准液 (20mL) 称取纯粹干燥的氨基酸0.2000g，用水溶解并定容至1mL摇匀，吸取此液1mL于1mL容量瓶中，加水定容至1mL ，即得20ml标准液。
3. 试验程序
( 1 )标准曲线绘制 精确吸取氨基酸标准液0，0.5 ，1.0，1.5，2.0 ，2.5mL(相当于0、10、20 、30 、40 、50问氨基酸)，分别置于25mL容量瓶中各加水至容积为4.0mL，然后加入2%茚三酮溶液和缓冲液各1mL，摇匀，置水浴中加热15min ，取出，迅速冷却至室温，加水至刻度，摇匀，静置15min后，采用分光光度计，用 lcm 比色杯在570nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
( 2 ) 样品测定 吸取试样2mL，按标准曲线制作步骤操作，测定吸光度并扣除样液空白值后，从标准曲线上查得氨基酸的质量(μg )，按下式计算样品的氨基酸总量(以某种氨基酸计)。
